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土壤纤维素酶(S-CL)测试盒的主要测定步骤

发布时间: 2023-05-11  点击次数: 339次
S-CL主要来源于土壤微生物,S-CL催化农作物秸秆产生的葡萄糖是主要的碳源营养物质。4-羟甲基-7-香豆-素(MUB)在365nm波长处激发,能在470nm处检测到荧光,它与某些物质结合后荧光特性消失,通过酶的水解作用MUB释放出来,通过检测荧光量来表征酶活性。 
试剂组成和配制: 
试剂一:液体120mL×1瓶,4℃保存。 
试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存。用前加11mL蒸馏水充分溶解(可50℃震荡溶解)。 
试剂三:液体10mL×1瓶,4℃保存。粗酶液提取:新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30~50目筛。
按照土壤质量(g):
试剂一mL)为 1:5~10的比例(建议称取约0.1g土壤,加入1mL试剂一),振荡混匀。 
测定步骤: 
测定管:在震荡条件下取100μL土壤悬液到EP管中,加入100μL试剂二,30℃震荡避光培养3h,从中吸取134μL到黑色不透光96孔板中,加入66μL试剂三后用多功能酶标仪进行检测,激发光波长365nm,测定波长470nm。
对照管:取100μL蒸馏水到EP管中,加入100μL试剂二,30℃震荡避光培养3h,从中吸取134μL到黑色不透光96孔板中,加入66μL试剂三后用多功能酶标仪进行检测,激发光波长365nm,测定波长 470nm。ΔA=A测定-A对照。