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ATP含量测试盒

简要描述:ATP含量测试盒测定意义:
ATP广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是生物能量通货,能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ATP含量并且计算能荷,能够反映能量代谢状态。
测定原理:
肌酸激酶催化肌酸和ATP反应生成磷酸肌酸,可在700nm下用磷钼酸比色法检测磷酸肌酸含量,以此反应ATP含量。

  • 产品型号:ATP-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-05-14
  • 访  问  量:436
详情介绍

ATP含量试剂盒说明书:

微量法100管/48样。

注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

测定意义:

ATP广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是生物能量通货,能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ATP含量并且计算能荷,能够反映能量代谢状态。

测定原理:

肌酸激酶催化肌酸和ATP反应生成磷酸肌酸,可在700nm下用磷钼酸比色法检测磷酸肌酸含量,以此反应ATP含量。

自备仪器和用品:

分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板、研钵和蒸馏水。

试剂组成和配制:

酸性提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存。

碱性提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂×1支,4℃保存;临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂二:液体1.5mL×1支,4℃保存。

试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入500μL蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂四:液体5mL×1瓶,4℃保存。

试剂五:液体25mL×1瓶,4℃保存。

标准液:液体10mL×1瓶,2μmol/mLATP标准液,4℃保存。

ATP提取:

1、血清(浆)中ATP的提取:按照血清(浆)体积(mL):酸性提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议取约0.1mL血清(浆),加入1mL酸性提取液),进行冰浴匀浆,8000g 4 ℃离心10min;取上清液至另一EP管中,加入等体积的碱性提取液使之中和,混匀,8000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。

2、组织中ATP的提取:按照组织质量(g):酸性提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL酸性提取液),进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心10min,取上清至另一EP管中,加入等体积的碱性提取液使之中和,混匀,8000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。

3、细胞或细菌中ATP的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104个):酸性提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL酸性提取液),超声波破碎1min(冰浴,强度20%或200W,超声2s,停1s),8000g 4 ℃离心10min;取上清液至另一EP管中,加入等体积的碱性提取液使之中和,混匀,8000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。

ATP含量试剂盒测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长到700nm,蒸馏水调零。

2、显色剂的配制:临用前请根据拟用显色剂体积(样本数×0.2 m L),按试剂四(mL):试剂五(mL)=1:5的比例配制。用多少配多少。

3、样本测定:

试剂名称(μL)

测定管

对照管

标准管

空白管

样本

10

10



标准液



10

10

试剂一

20


20


试剂二

10

10

10

10

试剂三

10


10


蒸馏水


30


30

充分混匀,37℃准确水浴30min

显色剂

200

200

200

200

37℃水浴20min后,700nm下测定各管吸光值。

注意:空白管和标准管通常只需要各做一个。每个测定管设一个对照管。

ATP含量计算:

1、血清(浆)中ATP含量计算

ATP含量(μmol/mL)=[C标准管×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ×V1]÷(V3×V1÷V2)=40×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)

2、组织、细菌或细胞中ATP含量计算

(1)按蛋白浓度计算

ATP含量(μmol/mg prot)=[C标准管×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ×V1]÷(V1÷Cpr)=2×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr

蛋白质含量需要另外测定。

(2)按样本鲜重计算

ATP含量(μmol/g鲜重)=[C标准管×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ×V1]÷(W×V1÷V2)=4×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W

(3)按细菌或细胞密度计算

ATP含量(μmol/104 cell)=[C标准管×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ×V1]÷(500×V1÷V2)=0.008×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)

C标准管:标准液浓度,2μmol/mL;V1:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V2:加入提取液体积,2mL;V3:加入血清(浆)体积:0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万。

注意:检测限为10nmol/mL或10nmol/g鲜重或0.1nmol/mg prot。







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