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NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)

简要描述:NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)试剂盒说明书 :
分光光度法50管/48样。
注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义:MDH(EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH 催化草酰乙酸形成苹果酸。

  • 产品型号:PMDH-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-04-25
  • 访  问  量:326
详情介绍

NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)试剂盒说明书:   

分光光度法50管/48样。

注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义:MDH(EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物,连接多条重要的代谢途径。因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,MDH 分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH,NADP-MDH主要存在于真核细胞中。

NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)试剂盒测定原理:NADP-MDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。

需自备的仪器和用品:紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一、提取液60mL×1瓶,在 4℃保存。

试剂二、液体 50mL×1瓶,在 4℃保存。

试剂三、粉剂×2支,-20℃保存;临用前加入300μL蒸馏水;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。 

试剂四、粉剂×2支,-20℃保存;临用前加入300μL蒸馏水;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

样本测定的准备: 

1、细菌、细胞或组织样品的制备:细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30 次);8000g 4℃离心10min,取上清置冰上待测。组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。



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