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还原型谷胱-甘肽(GSH)测试盒

简要描述:还原型谷胱-甘肽(GSH)测试盒测定意义:
GSH是细胞内最主要的抗氧化巯基物质,在抗氧化、蛋白质巯基保护和氨基酸跨膜运输等中具有重要作用。还原型与氧化型比值(GSH/GSSG)是细胞氧化还原状态的主要动态指标。因此,测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。

  • 产品型号:GSH-2-V
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-04-25
  • 访  问  量:401
详情介绍

还原型(reduced glutathione, GSH)试剂盒说明书:

分光光度法50管/48样。

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

GSH是细胞内主要的抗氧化巯基物质,在抗氧化、蛋白质巯基保护和氨基酸跨膜运输等中具有重要作用。还原型与氧化型比值(GSH/GSSG)是细胞氧化还原状态的主要动态指标。因此,测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。

还原型谷胱-甘肽(GSH)测试盒测定原理:

DTNB与GSH反应生成复合物,在412nm处有特征吸收峰;其吸光度与GSH含量成正比。

自备仪器和用品:

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体60ml×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体42ml×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体12ml×1瓶,4℃避光保存。

粗酶液提取:

1.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。

2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

3.血清等液体:直接测定。

还原型谷胱-甘肽(GSH)测试盒测定操作:

1. 分光光度计预热30min,调节波长到412nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二置于25℃(一般物种)或者37℃(哺乳动物)水浴中保温30min。

3. 空白管:取1mL玻璃比色皿,依次加入100μL蒸馏水,700μL试剂二,200μL试剂三,混匀静置2min后测定412nm吸光度A1。

4. 测定管:取1mL玻璃比色皿,依次加入100μL上清液,700μL试剂二,200μL试剂三,混匀静置2min后测定412nm吸光度A2。

注意:空白管只需要测定一次。

GSH含量计算公式:

GSH标准曲线公式:y=1.5 x(x为GSH浓度,μ mol /mL;y为吸光值)

GSH计算:

(1)按蛋白浓度计算

GSH(μ mol/ mg prot)=(A2-A1) ÷1.5×V样÷(V样×Cpr )=0.667×(A2-A1) ÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

GSH(μ mol/g鲜重)=(A2-A1) ÷1.5×V样÷(V样÷V样总×W)=0.667×(A2-A1) ÷W

(3)按细胞数量计算

GSH(μ mol /104 cell)=(A2-A1) ÷1.5×V样÷(V样÷V样总×细胞数量)=0.667×(A2-A1) ÷细胞数量

(4)按液体体积计算

GSH(μ mol/ mL)=(A2-A1) ÷1.5×V样÷V样 =0.667×(A2-A1)

V样总:上清液总体积,1 mL;V样:加入反应体系中上清液体积,100μL=0.1mL;W:样品质量,g ;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL。

注意事项:

1.试剂一中含有蛋白质沉淀剂,因此上清液不能用于蛋白浓度测定。

2.低检出限为0.01mmol/L。





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