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磷脂酶C(PLC)测试盒

简要描述:磷脂酶C( Phospholipases C,PLC )试剂盒说明书
测定意义:
磷脂酶C(EC 3.1.4.3)是一种水解甘油磷酸酯C3位点甘油磷酸酯键的脂类水解酶,广泛存在于微生物及动植物的组织和细胞中,在细胞代谢、细胞传递、生长发育等方面具有重要作用。
测定原理:
磷脂酶C催化水解NPPC产生对硝基酚,在410nm处有特征吸收峰。

  • 产品型号:PLC-2-V
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-05-14
  • 访  问  量:267
详情介绍

磷脂酶C( Phospholipases C,PLC )试剂盒说明书

                                     分光光度法50管/48样


注    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

磷脂酶C(EC 3.1.4.3)是一种水解甘油磷酸酯C3位点甘油磷酸酯键的脂类水解酶,广泛存在于微生物及动植物的组织和细胞中,在细胞代谢、细胞传递、生长发育等方面具有重要作用。


测定原理:

磷脂酶C催化水解NPPC产生对硝基酚,在410nm处有特征吸收峰。


自备实验用品及仪器:

天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。


试剂组成和配制 :

提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体55mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体25mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体20mL×1瓶,4℃保存。


酶液提取

1.组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心5min,取全部上清于4℃、100000g离心30min,弃上清,取沉淀溶于1mL试剂一。

2.细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后于4℃,10000g离心5min,取全部上清于4℃、100000g离心30min,弃上清,取沉淀溶于1mL试剂一。

3.血清:直接测定。                  


测定操作


空白管 测定管

样品(μL)  100

试剂一(μL) 100

试剂二(μL) 500 500

充分混匀,37℃反应30min

试剂三(μL) 400 400

充分混匀,于1mL玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定410nm处吸光值,分别记为A空白管和A测定管,△A=A测定管-A空白管。




酶活计算公式:

标准曲线:y = 0.0191x - 0.0103,R2 = 0.9991

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义:每毫克蛋白每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/mg prot)=(△A+0.0103)÷ 0.0191×V反总÷(V样×Cpr) ÷T

                   = 17.45×(△A+0.0103)÷ Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义:每克组织每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/g 鲜重)=(△A+0.0103)÷ 0.0191×V反总÷(V样÷V样总×W) ÷T

                   = 17.45×(△A+0.0103)÷ W

3.按照细胞数量计算

酶活性定义:每104个细胞每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/104 cell)=(△A+0.0103)÷ 0.0191×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量) ÷T

                   = 17.45×(△A+0.0103)÷ 细胞数量

4.按照液体体积计算

酶活性定义:每毫升血清每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/mL)= (△A+0.0103)÷ 0.0191×V反总÷V样÷T

                   = 17.45×(△A+0.0103)

V反总:反应总体积,1mL;V样:加入样本体积,0.1mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min







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