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羟脯-氨酸(HYP)测试盒

简要描述:测定意义:
HYP是机体胶原蛋白主要成分之一,胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等,因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。
测定原理:
样品经酸水解产生游离的HYP,进一步被氯胺T氧化,氧化产物与对二甲氨基苯甲-醛反应,产生红色化合物,在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值,可计算HYP含量。

  • 产品型号:HYP-2-V
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-03-29
  • 访  问  量:207
详情介绍

羟脯-氨酸(HydroxyprolineHYP)试剂盒说明书

分光光度法  50/48

  正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

HYP是机体胶原蛋白主要成分之一,胶原蛋白大多分布皮肤、腱、软骨血管等,因此HYP是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标

测定原理:

样品经酸水解产生游离的HYP,进一步被氯胺T氧化,氧化产物与对二甲氨基苯甲-醛反应,产生红色化合物,在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值,可计算HYP含量。

自备实验用品及仪器:

天平、烘箱、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、无水乙醇、异丙醇、6mol/L盐酸和蒸馏水。

试剂组成和配制:

组织提取液:6mol/L盐酸,自备。浓盐酸:H2OV/V= 1:1,室温保存。

细胞提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。

羟脯氨-酸提取:

1. 组织:称取约0.5g样品于玻璃管,加入5mL的组织提取液,置于110℃烘箱,水解612小时,用提取液定容至5mL12000g25℃,离心20min,取上清待测。

2. 细胞:取500万个细胞,加入2mL的细胞提取液,于高压消毒器中15磅保持30min,自然降压后待测。

3. 血清游离羟脯氨-酸提取:取0.2mL血清,加入1mL无水乙醇使蛋白质沉淀,8000g4℃离心5min。将上清倒入另一个EP管,氮吹或沸水浴将乙醇挥发干。冷却后再加入0.4mL50%异丙醇,充分溶解混匀待测。





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