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脂氧合酶 (LOX)测试盒

简要描述:测定意义:
LOX广泛存在于动植物组织中,催化不饱和脂肪酸氧化反应,导致膜脂过氧化。在生物体的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。

测定原理:
LOX催化油酸氧化,氧化产物在280nm处有特征吸收峰;测定280nm吸光度增加速率,来计算LOX活性。

  • 产品型号:LOX-2-UV
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-03-29
  • 访  问  量:257
详情介绍

脂氧合酶(Lipoxygenase, LOX)活性测定试剂盒说明书

                                                分光光度法50管/24样


注   意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

LOX广泛存在于动植物组织中,催化不饱和脂肪酸氧化反应,导致膜脂过氧化。在生物体的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。


测定原理:

LOX催化亚酸氧化,氧化产物在280nm处有特征吸收峰;测定280nm吸光度增加速率,来计算LOX活性。


自备仪器和用品:

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。


试剂组成和配制:

试剂一:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。


粗酶液提取:

按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心20min,取上清置冰上待测。


测定:

1. 分光光度计预热30 min,调节波长到280nm,蒸馏水调零。

2. 在试剂三中加入25mL试剂二(振荡混匀1min),在30℃水浴中预热10 min以上。用不完的试剂4℃保存。

3. 对照管:依次在1mL石英比色皿中加入100μL样本和900μL试剂二,30℃反应30min后,记录A对照。

4. 测定管:依次在1mL石英比色皿中加入100μL样本和900μL试剂三,30℃反应30min后,记录A测定。

5. ΔA=A测定-A对照


LOX活性计算公式:

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.01个单位为1个酶活单位。

LOX (U/mg prot) =ΔA×V反总÷(Cpr×V样)÷T×100

= 33.33×ΔA÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化0.01个单位为1个酶活单位。

LOX (U/g 鲜重) =ΔA×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T×100

= 33.33×ΔA÷W

Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL,需另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒;V样:加入反应体系中上清液体积,100μL=0.1mL;V反总:反应总体积,1mL;V样总:上清液总体积,1mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min。





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