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氧化型谷胱-甘肽(GSSG)含量测试盒

简要描述:测定意义:
GSH/GSSG是细胞内最重要的氧化还原对之一。因此,测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态,也是谷甘肽氧化还原循环的主要指标之一。

测定原理:
利用2-VP法测GSSG含量。

  • 产品型号:GSSG-2-V
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-05-14
  • 访  问  量:348
详情介绍

氧化型谷胱-甘肽(GSSG)试剂盒说明书

                                           

                                                      分光光度法50管/48样


注    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

GSH/GSSG是细胞内最重要的氧化还原对之一。因此,测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态,也是谷甘肽氧化还原循环的主要指标之一。


测定原理:

利用2-VP法测GSSG含量。


自备仪器和用品:

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。


试剂组成和配置:

试剂一:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体300μL×1支,4℃保存。

试剂三:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂四:液体6mL×1瓶,4℃保存。

试剂五: 液体30μL×1瓶,-20℃保存。临用前加入0.6 mL试剂三稀释,4℃保存。

试剂六:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入40 mL试剂三溶解,现配现用。


粗酶液提取:

1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清液(如上清不清澈,再离心3min)待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);8000g 4℃离心10min,取上清液(如上清不清澈,再离心3min)的蒸馏水混匀待测。

3. 血清等液体:直接测定。


测定操作:

1. 分光光度计预热30 min,调节波长到412 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂三置于25℃(一般物种)或者37℃(哺乳动物)水浴中保温30min。

3. 测定管:取1 mL EP管,加入100 μ L上清液,5μ L试剂二,盖紧后混匀,置于37℃水浴30min;依次加入100 μ L试剂四,10 μ L试剂五,700 μ L试剂六,迅速混匀后,立即测定30 s和150 s光吸收A1和A2,计算ΔA=A2-A1。


GSSG含量计算公式:

1、标准条件下测定的回归方程为y=0.0276x-0.0011;x为标准品浓度(nmol/mL),y为吸光值(ΔA)。

2、 按蛋白浓度计算

GSSG(nmol/mg prot)=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V样÷(V样×Cpr)

=36.23×(ΔA+0.0011)÷Cpr

3、按样本鲜重计算

GSSG(nmol /g 鲜重)=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V样÷(V样÷V样总×W)

=36.23×(ΔA+0.0011)÷W

4、按细胞数量计算

GSSG(nmol/104 cell)=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V样÷(V样÷V样总×细胞数量)

=36.23×(ΔA+0.0011)÷细胞数量

5、按照液体体积计算

GSSG(nmol/mL)=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V样÷V样

=36.23×(ΔA+0.0011)

V样:反应中加入样本体积,0.1mL;V样总:加入提取液体积, 1mL;W:样品质量,g,Cpr:样本蛋白浓度(mg/mL)


注意事项:

1.提取过程中去掉蛋白质,所以提取液不能用于测定蛋白含量。

2.临用前配制的试剂配好后4℃保存,2天内使用完毕。

3.低检出限为0.1μmol/L。

4.反应温度.严格来说,为保证重复性,应在25℃下进行反应。

5.反应时间需精确控制,否则会影响反应速率计算,产生较大误差。

样品中的GSSG浓度尽可能低一些,否则反应速率太大,没法控制,所以稀





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