产品展示 / products 您的位置:网站首页 > 产品展示 > 生化试剂盒 > 氧化与抗氧化系列 > PRO-2-V脯-氨-酸(PRO)含量测试盒

脯-氨-酸(PRO)含量测试盒

简要描述:测定意义:
Pro广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,逆境条件下,植物体内Pro含量显著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性强的品种往往积累较多的/脯氨/酸。因此,脯/氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。

测定原理:
用磺基水杨酸(SA)提取Pro,加热处理后,Pro与酸性茚三酮溶液反应生成红色;加甲苯萃取后,在520nm测定吸光度。

  • 产品型号:PRO-2-V
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-05-05
  • 访  问  量:185
详情介绍

脯/氨酸(PRO)含量测定试剂盒说明书

分光光度法50管/48样

注   意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

Pro广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,逆境条件下,植物体内Pro含量显著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性强的品种往往积累较多的脯/氨酸。因此,脯/氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。


测定原理:

用磺基水杨酸(SA)提取Pro,加热处理后,Pro与酸性茚三酮溶液反应生成红色;加甲苯萃取后,在520nm测定吸光度。


需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、冰乙酸50mL、甲苯50mL、研钵、冰和蒸馏水。


试剂的组成和配制:

提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:冰乙酸25 mL×1瓶, 4℃保存。(自备)

试剂二:液体25 mL×1瓶, 4℃保存。

试剂三:甲苯50mL×1瓶,4℃保存。(自备)


样品测定的准备:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);之后置95℃水浴振荡提取10min;10000g,25℃离心10min,取上清,冷却后待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行匀浆;之后置95℃水浴振荡提取10min;10000g,25℃离心10min,取上清,冷却后待测。

2、血清(浆)样品:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议取0.1mL血清(浆)加入1mL提取液),充分混匀,之后置95℃水浴振荡提取10分钟,10000g,25℃离心10分钟,取上清,冷却后待测。



测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至520nm,蒸馏水调零。

2、样本测定:

(1)取0.5mL样本+0.5mL试剂一+0.5mL试剂二 于有盖试管中,置95℃水浴中保温30min(盖紧,防止水分散失),每10min振荡一次。

(2)待冷却后,在试管中加入1mL试剂三,振荡30s,静置片刻,使色素转至试剂三中;吸取0.8mL-1mL上层溶液于1mL玻璃比色皿中,于520nm波长处比色,记录吸光值A。


Pro含量计算:

1、典型回归方程y = 0.0521x - 0.0021  (x为脯/氨酸含量,μg/mL;y为吸光值A)

2、按照血清(浆)体积计算

Pro含量(μg/mL)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(V3×V1÷V2)=192×(A+0.0021)

3、按照蛋白浓度计算

Pro含量(μg/mg prot)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(V1×Cpr)=19.2×(A+0.0021)÷Cpr

4、按照样本质量计算

Pro含量(µg/g鲜重)= [(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(W×V1÷V2)=19.2×(A+0.0021) ÷W

5、按照细菌或细胞密度计算

Pro含量(μg/104 cell)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0384×(A+0.0021)


V1:加入反应体系中样本体积,0.5mL;V2:加入提取液体积,1 mL;V3:加入血清(浆)体积,0.1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。



注意:检测限为1μg/mL或1μg /g鲜重 或0.01μg /mg prot







留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7