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过氧化氢酶(CAT)测试盒(紫外吸收法)

简要描述:过氧化氢酶(CAT)测试盒(紫外吸收法)测定意义:CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。
测定原理:H2O2在240nm下有特征吸收峰,CAT能够分解H2O2,使反应溶液240nm下的吸光度随反应时间而下降,根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。

  • 产品型号:CAT-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-05-05
  • 访  问  量:285
详情介绍

过氧化氢酶(CAT)测试盒(紫外吸收法)说明书:

微量法100管/96样。

注意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

测定意义:CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。

测定原理:H2O2在240nm下有特征吸收峰,CAT能够分解H2O2,使反应溶液240nm下的吸光度随反应时间而下降,根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。

需自备的仪器和用品:紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;

工作液:液体24mL×1瓶,4℃保存。

粗酶液提取:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

过氧化氢酶(CAT)测试盒(紫外吸收法)测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至240nm,蒸馏水调零。

2、测定前将CAT检测工作液在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上。

3、准备96孔UV板一块(非普通酶标板,普通酶标板只能透过可见光,不能透过紫外光,检测波长小于340nm务必使用UV板)。

4、在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μL样本和190μL工作液,混匀,记录240nm下初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。计算ΔA=A1-A2。





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