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碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒

简要描述:测定意义:
AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。

测定原理:
在碱性环境中,AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与4-氨基安/替比林和铁反应红色亚醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通过测定510 nm吸光度增加速率,来计算AKP活性。

  • 产品型号:AKP-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-03-31
  • 访  问  量:246
详情介绍

碱性磷酸酶(AKP/ALP)活性测定试剂盒说明书

微量法100T/48S



注   意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。


测定原理:

在碱性环境中,AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与4-氨基安/替比林和铁反应红色亚醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通过测定510 nm吸光度增加速率,来计算AKP活性。

自备仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸馏水。


试剂组成和配制:

试剂一:液体×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体×1瓶,4℃避光保存。

试剂四:液体×1瓶,4℃避光保存,未变成蓝绿色之前均可使用。

标准品:液体×1支(EP管中),2 μmol/mL酚标准液,4℃保存。


粗酶液提取:

1.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,4℃、8000g离心10min,取上清液待测。

2.细菌或细胞:按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

3.血液可直接测定,或者适当稀释后测定。



测定步骤:

1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到510 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂三置于37℃水浴中预热30 min。

3. 空白管:取EP管,加入4μL蒸馏水,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A空白管。

4. 标准管:取EP管,加入4μL标准品,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A标准管。

5. 对照管:取EP管,加入4μL上清液,40μL蒸馏水,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A测定管。

6. 测定管:取EP管,加入4μL上清液,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A测定管。

其中标准管和空白管只需做一管,测定管和对照管每个样均需做。

注意:空白管和标准管只需测定一次。


AKP/ALP活性计算:

1.血液中AKP/ALP活力计算

活性单位定义:37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚定义为1个酶活单位。

AKP/ALP活力(μmol/min /mL)= [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总] ÷V样÷T=6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)

2.组织、细菌或细胞中AKP/ALP活性计算

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1 μ mol酚定义为1个酶活单位。

AKP/ALP(μmol/min/mg prot)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(Cpr×V样)÷T=6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:37℃中每克组织每分钟催化产生1 μ mol酚定义为1个酶活单位。

AKP/ALP(μmol/min/g 鲜重)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ÷W

(3)按照细菌或细胞数量计算

活性单位定义:37℃中每104个细菌或细胞每分钟催化产生1 μ mol酚定义为1个酶活单位。AKP/ALP (μmol/min/104 cell)= [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T= 6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ÷细胞数量


C标准品:2μmol/mL;V反总:反应体系总体积(mL),205μL=0.205mL; Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司生产的BCA蛋白质含量测定试剂盒;W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),0.004mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间(mi





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