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脯/氨酸(PRO)含量测试盒

简要描述:脯/氨酸(PRO)含量测试盒
测定意义:
ProDH是存在于线粒体内的催化脯/氨酸降解的关键酶。脯/氨酸是分布广泛的一种渗透物质,在胁迫条件下很多植物可以通过增加合成、减少降解而在体内累积大量脯/氨酸,降低ProDH活性对于调节渗透平衡、防止渗透胁迫对植物造成伤害、清除自由基、保护细胞结构具有重要意义。

  • 产品型号:PRO-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-05-14
  • 访  问  量:229
详情介绍

脯/氨酸(PRO)含量测试盒

测定意义:

ProDH是存在于线粒体内的催化脯/氨酸降解的关键酶。脯/氨酸是分布广泛的一种渗透物质,在胁迫条件下很多植物可以通过增加合成、减少降解而在体内累积大量脯/氨酸,降低ProDH活性对于调节渗透平衡、防止渗透胁迫对植物造成伤害、清除自由基、保护细胞结构具有重要意义。

测定原理:

利用异硫氰酸甲酯检测ProDH催化的脱氢反应,600nm处吸光值的吸光值的变化反映酶活性的高低。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。


试剂的组成和配制:

提取液:100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体2 mL×1支, 4℃保存;

试剂二:液体25mL×1瓶, 4℃保存;

试剂三:粉剂×1瓶, 4℃保存;临用前加入4mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;

试剂四:粉剂×1瓶, 4℃保存;临用前加入4mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;

试剂五:粉剂×4支,4℃保存;

脯/氨酸(PRO)含量测试盒

粗酶液提取:

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆,1500g 4℃离心15min,取上清液于一支新的EP管中,加入一滴试剂一(用10μL的枪头加入),涡旋混匀,冰浴放置30min后,16000g 4℃离心20min,取上清置冰上待测。


测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至600nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

(1)混合液的配制:首先将试剂三和试剂四配成溶液(见试剂的组成和配制),临用前根据用量按照试剂二(V):试剂三(V):试剂四(V)=2.4(mL):0.3(mL):0.3(mL)的比例充分混匀。(注意:现配现用,用多少配多少),置于30℃水浴5min;

(2)试剂五的配制:取试剂五一支,临用前加入500μL蒸馏水充分溶解待用,现配现用。

(3)在微量石英比色皿或96孔板中加入35μL样本、15μL试剂五和150μL混合液,混匀,立即记录600nm处初始吸光值A1和10min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。


ProDH活性计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位定义:每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使600nm处吸光值变化0.01为一个

酶活力单位。

ProDH(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.01÷T =57.14×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位定义:每分钟每g组织在每mL反应体系中使600nm处吸光值变化0.01为一个

酶活力单位。

ProDH(U/g 鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.01÷T =57.14×ΔA÷W

V反总:反应体系总体积,0.2mL; V样:加入样本体积,0.035mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,10 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。


b.用96孔板测定的计算公式如下

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位定义:每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使600nm处吸光值变化0.005为一个

酶活力单位。

ProDH(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.005÷T =114.29×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位定义:每分钟每g组织在每mL反应体系中使600nm处吸光值变化0.005为一个

酶活力单位。

ProDH(U/g 鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.005÷T =114.29×ΔA÷W

V反总:反应体系总体积,0.2mL;V样:加入样本体积,0.035mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,10 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。





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