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游离脂肪酸含量(FFA)

简要描述:游离脂肪酸,也称为非酯化脂肪酸,在与白蛋白结合的血浆中循环。动物血液中的游离脂肪酸 (FFA )含量是一项重要的生理生化指标。血清中游离脂肪酸的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关,游离脂肪酸的浓度会因为糖尿病、重症肝障碍、甲状腺功能亢进等疾病而上升。

  • 产品型号:FFAD-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-03-15
  • 访  问  量:257
详情介绍

测定意义:

游离脂肪酸,也称为非酯化脂肪酸,在与白蛋白结合的血浆中循环。动物血液中的游离脂肪酸 (FFA )含量是一项重要的生理生化指标。血清中游离脂肪酸的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关,游离脂肪酸的浓度会因为糖尿病、重症肝障碍、甲状腺功能亢进等疾病而上升。 


测定原理:

用有机溶剂萃取FFA。含有FFA的有机液与三乙醇胺铜反应,在有机相中形成脂肪酸铜 (铜皂) FFA一Cu。Cu离子与显色液反应形成紫红色络合物。反应形成的颜色深浅与Cu离子浓度的关系符合朗伯一比尔定律,因此可利用此反应进行比色。


自备的仪器和用品:

酶标仪、离心机、可调式移液器、96孔板、蒸馏水。

试剂的组成和配制:

萃取液:液体 120 mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体 15 mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:液体 15 mL×1瓶,4℃保存;

试剂三:粉剂×1瓶,室温保存;

试剂四:液体 12 mL×1瓶,4℃保存;


样本前处理:

1.动物组织:按照动物组织质量(g):萃取液mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL萃取液),进行冰浴匀浆。震荡提取15min,5000 rpm 4℃离心5min,取有机相待测。

2.血清:吸取50 μL血清样本,加入1 mL萃取液,震荡提取15 min后,4℃,5000 rpm离心5 min,取有机相待测。

3.微生物、细胞:按照细胞数量(104个):萃取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1 mL萃取液)加入萃取液,冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声2秒,间隔3秒,总时间3min);震荡提取15 min,然后5000 rpm 4℃离心5min,取有机相待测。

注意:有机相待测液可能存在于上层,也可能存在于下层,注意观察,体积较多的那一层即为有机相待测液。


测定步骤:

1、酶标仪预热30min以上,调节波长至550 nm。

2、工作液的配制:临用前根据用量按照试剂一(V):试剂二(V):试剂三(m)=1(mL):1(mL):0.66(g)的比例充分混匀。(注意:现用现配,用多少配多少,在空瓶中配制,试剂盒中带有4个空瓶,先将试剂一与试剂二混合,最后再加入试剂三粉剂)

3、测定管:吸取600μL样本,加入200μL工作液,盖紧后震荡20 min,4℃,5000 rpm离心5 min,分层后取200μL上层有机相,加入100μL试剂四,摇匀,10 min后测定550 nm的吸光值,记为A测定。

4、空白管:吸取600μL萃取液,加入200μL工作液,盖紧后震荡20 min,4℃,5000 rpm离心5 min,分层后取200μL上层有机相,加入100μL试剂四,摇匀,10 min后测定550 nm的吸光值,记为A空白。

空白管只需测一次。△A=A测定-A空白

注意:1、有机溶剂易挥发,加入96孔板后应尽快检测。

2、测定管中加入的样本即样本前处理中的有机相待测液。




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