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中性//蛋白酶测试盒

简要描述:测定意义:
NP在一定的温度和中性pH条件下,催化水解蛋白质。由于其安全无毒、水解能力强、作用范围广等特点,中性//蛋白酶常用于食品、饲料、化妆品和营养保健品生产。

测定原理:
中性条件下,NP催化酪蛋白水解产生酪//氨酸;在碱性条件下,酪//氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在680nm有特征吸收峰

  • 产品型号:NPT-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-03-15
  • 访  问  量:185
详情介绍

测定意义:

NP在一定的温度和中性pH条件下,催化水解蛋白质。由于其安全无毒、水解能力强、作用范围广等特点,中性//蛋白酶常用于食品、饲料、化妆品和营养保健品生产。


测定原理:

中性条件下,NP催化酪蛋白水解产生酪//氨酸;在碱性条件下,酪//氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在680nm有特征吸收峰。         


自备仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1.5 mL EP管和蒸馏水。


试剂组成和配制:

试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加4mL蒸馏水溶解。

试剂三:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加入10mL试剂一,沸水浴中磁力搅拌溶解。(可在烧杯上盖一层保鲜膜,注意观察,避免水分全部蒸发,一般加热15-30分钟,该试剂为过饱和试剂,充分混匀后仍出现颗粒物不溶物不影响使用)。

试剂四:粉剂×1瓶, 4℃保存。临用前加20mL蒸馏水溶解。

试剂五:液体4mL×1瓶,4℃保存。

标准品:液体1mL×1支,0.25μmol/mL标准酪//氨酸溶液,4℃保存。


粗酶液提取:

1.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即粗酶液。

2.血清或培养液:直接测定。

3.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。



测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到680 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二、试剂三和试剂四置于30℃水浴保温30min。

3. 对照管:取0.5 mL EP管,加入20μL粗酶液,40μL试剂二,混匀后置于30℃水浴保温10min;加入40μL试剂三,混匀后8000g,4℃离心10min;取40μL上清液,加入新的EP管,再加入200μL试剂四,40μL试剂五,混匀后置于30℃水浴保温20min,取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板,于680nm测定光吸收,记为A对照管。

4. 测定管:取0.5 mL EP管,加入20μL粗酶液,40μL试剂三,混匀后置于30℃水浴保温10min;加入40μL试剂二,混匀后8000g, 4℃离心10min;取40μL上清液,加入新的EP管,再加入200μL试剂四,40μL试剂五,混匀后置于30℃水浴保温20min,取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板,于680nm测定光吸收,记为A测定管。(注意与空白管不同,先加试剂三,后加试剂二)

5. 空白管:取0.5 mL EP管,加入40μL蒸馏水,200μL试剂四,40μL试剂五,混匀后置于30℃水浴保温20min,取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板,于680nm测定光吸收,记为A空白管。

6. 标准管:取0.5 mL EP管,加入40μL标准品,200μL试剂四,40μL试剂五,混匀后置于30℃水浴保温20min,取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板,于680nm测定光吸收,记为A标准管。

注意:空白管和标准管只需要测定一次。




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