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总多糖含量

简要描述:测定意义:
多糖是生物体中广泛存在的物质,是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物,它是生物体内重要的生物大分子,是维持生命活动正常运转的基本物质之一。

测定原理:
利用水提醇沉法提取总多糖,苯//酚-硫酸法测定总多糖含量

  • 产品型号:ZDT-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-04-19
  • 访  问  量:182
详情介绍

测定意义:

多糖是生物体中广泛存在的物质,是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物,它是生物体内重要的生物大分子,是维持生命活动正常运转的基本物质之一。


测定原理:

利用水提醇沉法提取总多糖,苯//酚-硫酸法测定总多糖含量


需自备的仪器和用品:

酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96孔板、无水乙醇、浓硫酸、蒸馏水、水浴锅。


试剂的组成和配制:

试剂一:12mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:无水乙醇,自备;

试剂三:浓硫酸,自备。


总多糖提取:

样本烘干粉碎,称取约0.05g样本,加入1mL水,充分匀浆。100℃水浴提取2h(必须盖紧盖子防止水分流失),冷却后10000g离心10min,取上清。吸取0.2mL上清,慢慢加入0.8mL无水乙醇,混匀后4℃静置过夜,10000g离心10min,弃上清,沉淀中加入1mL水,充分混匀溶解沉淀。


测定步骤

1、酶标仪预热30min以上,调节波长至490nm。

2、吸取200µL上清,加入100µL试剂一和0.5mL浓硫酸,混匀后90℃水浴20min,流水冷却。取200µL加入酶标板,于490nm下测定吸光值A。



总多糖含量计算:        

以葡萄糖作为对照品,标准条件下测定回归方程为y = 7.981x - 0.0037,R2 = 0.9973,x为葡萄糖含量(mg/mL),y为吸光值。

总多糖含量(μg/g干重)= (A +0.0037)÷7.981×V1÷V2×V3÷W×1000

=626.49×(A+0.0037) ÷W

V1:醇沉后重新溶解后的体积,1mL;V2:进行醇沉的体积,0.2mL;V3,提取时加入水的体积,1mL;W:样本质量,g;1000,mg到μg的换算系数。






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