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琥珀酸脱氢酶(SDH)测试盒

简要描述:测定意义:
SDH(EC 1.3.5.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH是线粒体的一种标志酶,位于线粒体内膜上的一种膜结合酶,是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。此外,为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子

  • 产品型号:SDH-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-03-15
  • 访  问  量:189
详情介绍

测定意义:

SDH(EC 1.3.5.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH是线粒体的一种标志酶,位于线粒体内膜上的一种膜结合酶,是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。此外,为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。


测定原理:

SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸,脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸(PMS)传递还原2,6-二氯酚靛酚(DCPIP),并且在600nm处具有特征吸收峰,通过600nm吸光度的变化,测定2.6-DPIP的还原速度,代表SDH酶活性。


需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。


试剂的组成和配制:

试剂一:100mL×1瓶,-20℃保存;

试剂二:20mL×1瓶,-20℃保存;

试剂三:1.5mL×1支,-20℃保存;

试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存;

试剂五:粉剂×1支,-20℃保存;


样本的前处理:

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

1、称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2、将匀浆600g,4℃离心5min。

3、弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。

4、上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的SDH(此步可选做)。

5、在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3秒,间隔10秒,重复30次),用于线粒体SDH活性测定。



测定步骤和加样表:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至600nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

(1)在试剂四中加入18mL蒸馏水充分溶解,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

(2)在试剂五中加入1mL蒸馏水,充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

(3)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、10μL试剂五和180μL试剂四,混匀,立即记录600nm处20s时的吸光值A1和 1min20s后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2。




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