产品展示 / products 您的位置:网站首页 > 产品展示 > 生化试剂盒 > 果胶系列 > PK-1-M丙酮酸激酶(PK)测试盒

丙酮酸激酶(PK)测试盒

简要描述:测定意义:
PK(EC 2.7.1.40)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化糖酵解过程中的后一步反应,是糖酵解过程中的主要限速酶之一,也是产生ATP的关键酶之一,因此测定PK活性具有重要意义。

  • 产品型号:PK-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-05-14
  • 访  问  量:234
详情介绍

测定意义:

PK(EC 2.7.1.40)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化糖酵解过程中的后一步反应,是糖酵解过程中的主要限速酶之一,也是产生ATP的关键酶之一,因此测定PK活性具有重要意义。


测定原理:

PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸,乳酸脱氢酶进一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD+,在340nm下测定NADH下降速率,即可反映PK活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水


试剂的组成和配制:

提取液:100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存;; 

试剂二:粉剂×2瓶,-20℃保存; 

试剂三:液体10μL×2支,4℃保存; 


样本的前处理:

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测。


测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

(1)试剂二的配制:临用前取试剂二一瓶,加入9mL试剂一和1.06mL蒸馏水充分溶解,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min;现配现用。

(2)试剂三的配制:临用前取试剂三一支,加入0.6mL蒸馏水充分溶解待用;现配现用。

(3)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、10μL试剂三和180μL试剂二,混匀,立即记录340nm处20s时的吸光值A1和 2min20s后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2。




留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7