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谷胱//甘肽过氧化物酶(GPX)测试盒

简要描述:测定意义:
GSH-Px是谷胱/甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱/甘肽(GSH)氧化的主要酶之一。GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱/甘肽与ROS反应,生成氧化型谷胱/甘肽GSSG,从而保护生物膜免受ROS的损害,维持细胞的正常功能;而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力

  • 产品型号:GPX-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-03-17
  • 访  问  量:221
详情介绍

测定意义:

GSH-Px是谷胱/甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱/甘肽(GSH)氧化的主要酶之一。GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱/甘肽与ROS反应,生成氧化型谷胱/甘肽GSSG,从而保护生物膜免受ROS的损害,维持细胞的正常功能;而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。


测定原理:

GSH-Px催化有机过氧化物氧化GSH,产生GSSG;谷胱/甘肽还原酶(GR)催化NADPH还原GSSG,再生GSH,同时NADPH氧化生成NADP+;NADPH在340 nm有特征吸收峰,而NADP+没有;通过测定340 nm光吸收减少速率来计算GSH-Px活性。


自备仪器和用品:

低温离心机、水浴锅、可调节移液器、酶标仪、96孔板、和蒸馏水。


试剂组成和配置:

试剂一:液体120mL×1瓶,室温保存。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体10μL×1支,-20℃保存。

试剂四:液体200μL×1瓶,4℃保存。


粗酶液提取:

1.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。

2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

3.血清等液体:直接测定。


GSH-Px测定操作:

1. 酶标仪预热30 min,调节波长到340 nm。

2. 混合试剂在25℃或者37℃(哺乳动物)水浴中预热30min。

3. 混合试剂配制:临用前,在试剂二中加入试剂一20 mL,充分震荡溶解后加入全部试剂三,混匀。(当天用完)

4. 试剂四的稀释:吸取21.5μL试剂四,加入5mL蒸馏水充分混匀,临用前配制,配制好的试剂当天使用。

5. 测定管:依次在96孔板中加入20μL上清液、160μL预热的混合试剂、20μL稀释后的试剂四,迅速混匀后于340nm处测定第30 s和第210s的吸光值,分别记为A1和A2。△A测定管= A1﹣A2。





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