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超氧化物歧化酶(SOD)测试盒(NBT法)

简要描述:超氧化物歧化酶(SOD)测试盒(NBT法)测定意义:
SOD(EC 1.15.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化超氧化物阴离子发生岐化作用,生成H2O2和 O2。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化系统中具有重要作用。

  • 产品型号:SOD-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-04-25
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详情介绍

超氧化物歧化酶(SOD)测试盒(NBT法)测定意义:

SOD(EC 1.15.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化超氧化物阴离子发生岐化作用,生成H2O2和 O2。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化系统中具有重要作用。

测定原理:

通过嘌呤及嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-),O2-可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜,后者在560nm处有吸收;SOD可清除O2-,从而抑制了甲臜的形成;反应液蓝色越深, 说明SOD活性愈低,反之活性越高。

需自备的仪器和用品:

酶标仪、离心机、移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体5mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:液体200μL×1支,4℃保存;

试剂三:液体4mL×1瓶,4℃保存;

试剂四:粉剂×2瓶,4℃保存。

粗酶液提取:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或 200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

超氧化物歧化酶(SOD)测试盒(NBT法)测定步骤:

1、酶标仪预热30min以上,调节波长至560nm。

2、将试剂二用蒸馏水稀释两倍,用多少配多少。(试剂二和蒸馏水1:1稀释)

3、将一瓶试剂四用5mL蒸馏水溶解(溶解后一周内用完),再用蒸馏水稀释4倍,用多少配多少(试剂四和蒸馏水1:3稀释)。

4、测定前将试剂一、三和四在37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)水浴5min以上。

5、样本测定(在EP管或96孔板中依次加入下列试剂)。




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