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羧酸酯酶(CarE)测试盒

简要描述:测定意义:
哺乳动物CarE,也称脂族酯酶(aliesterase),广泛分布于组织和器官,属于氨酸水解酶家族。CarE 催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解,但不能催化水解乙酰碱及其类似物。CarE 参与脂质运输和代谢,并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关,有机磷农药可结合并且抑制CarE 活性。

  • 产品型号:CARE-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-05-14
  • 访  问  量:248
详情介绍

测定意义:

哺乳动物CarE,也称脂族酯酶(aliesterase),广泛分布于组织和器官,属于氨酸水解酶家族。CarE 催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解,但不能催化水解乙酰碱及其类似物。CarE 参与脂质运输和代谢,并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关,有机磷农药可结合并且抑制CarE 活性。


测定原理:

CarE 能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,固篮显色;在 450 nm 光吸收增加速率,计算 CarE 活性。


自备仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。


试剂组成和配置:

试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 15mL×2 瓶, 4℃保存;

试剂三:粉剂×2 支, 4℃保存,临用前取 1 支试剂三,加 0.6ml 无水乙醇充分溶解; 

试剂四:粉剂×2 支,-20℃保存,临用前取 1 支试剂四,加少量试剂二溶解;

工作液配制:临用前配制,向 1 瓶试剂二中,加入溶解后的试剂三和试剂四各 1 支,充分溶

解,过滤,4℃避光保存,可用 1 周。


粗酶液提取:

细菌、细胞样品制备

收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 200 万细菌或细胞加入 400μL 试剂一, 超声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);12000g 4℃离心 30min,取上清液待测。

2、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆;12000g 4℃离心 30min,取上清液待测。

3、液体:直接测定


测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长到 450 nm,蒸馏水调零。

2. 工作液置于 37℃水浴中预热 30 min。

3. 空白管:取微量玻璃比色皿/96 孔板,依次加入 5μL 蒸馏水和 200μL 工作液,迅速混匀, 于 450nm 处测定 3min 内吸光值变化,第 10s 吸光值记为 A1,第 190s 吸光值记为 A2。△A 空白管=A2-A1

4. 测定管:取微量玻璃比色皿/96 孔板,依次加入 5μL 上清液和 200μL 工作液,迅速混匀, 于 450nm 处测定 3min 内吸光值变化,第 10s 吸光值记为 A3,第 190s 吸光值记为 A4。△A 测定管=A4-A3

注意:空白管只需测定一次。




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