产品展示 / products 您的位置:网站首页 > 产品展示 > 生化试剂盒 > 辅酶Ⅰ系列 > NAD-1-M辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒

辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒

简要描述:测定意义:

辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循环(TCA)的主要氢受体,生成的 NADH 经呼吸电子链(ETC)传递把电子交给氧, 在合成 ATP 的同时,形成大量的 ROS,同时NADH 再生为 NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖

  • 产品型号:NAD-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-03-20
  • 访  问  量:201
详情介绍

测定意义:

辅酶NAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循环(TCA)的主要氢受体,生成的 NADH 经呼吸电子链(ETC)传递把电子交给氧, 在合成 ATP 的同时,形成大量的 ROS,同时NADH 再生为 NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和 TCA 循环的强弱。较高的 NAD(H)NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循环。另外,NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。  

测定原理:

分别用酸性和碱性提取液提取样品中 NAD+ NADHNADH 通过 PMS 的递氢作用,还原

氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在 570nm 下检测吸光值;而 NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH,进一步采用 MTT 还原法检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

酸性提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;

碱性提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:液体 4 mL×1 瓶,4℃保存;

试剂三:粉剂×1 瓶,-20 ℃保存,用时加入 4mL 蒸馏水,混匀,用不完的试剂 4℃保存一周;

试剂四:粉剂×1 瓶,4 ℃保存,用时加入 4mL 蒸馏水,混匀,用不完的试剂 4℃保存一周;

试剂五:液体 1.8mL×1 支,4 ℃保存;

试剂六:液体 30mL×1 瓶,4 ℃保存;

试剂七:液体 50mL×1 瓶,4 ℃保存。


NAD+ NADH 的提取

1血清(浆)中 NAD+ NADH 的提取

NAD+的提取:按照血清(浆)体积(mL):酸性提取液体积(mL)为 15~10  的比例(建议取约 0.1mL 血清(浆),加入 1mL 酸性提取液),95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

NADH 的提取:按照血清(浆)体积(mL):碱性提取液体积(mL)为 15~10 的比例(建议取约 0.1mL 血清(浆),加入 1mL 碱性提取液),95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测。





留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7