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葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)测试盒

简要描述:测定意义:  6PG (Glucose-6-phosphate,葡萄糖-6-磷酸,又称6-磷酸葡萄糖),是糖酵解和磷酸戊糖途径的中间产物,广泛存在于动植物体和微生物中。在糖酵解的一步反应中,葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸,然后通过磷酸葡萄糖异构酶的催化形成果糖-6-磷酸,以继续糖酵解的其它步骤;而在戊糖磷酸途径中,葡萄糖-6-磷酸是其一个底物,该过程也是生成NADPH的主要途径。此外

  • 产品型号:PEPCK-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-05-14
  • 访  问  量:275
详情介绍

测定意义:  6PG (Glucose-6-phosphate,葡萄糖-6-磷酸,又称6-磷酸葡萄糖),是糖酵解和磷酸戊糖途径的中间产物,广泛存在于动植物体和微生物中。在糖酵解的一步反应中,葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸,然后通过磷酸葡萄糖异构酶的催化形成果糖-6-磷酸,以继续糖酵解的其它步骤;而在戊糖磷酸途径中,葡萄糖-6-磷酸是其一个底物,该过程也是生成NADPH的主要途径。此外,葡萄糖-6-磷酸也能转化形成糖原或淀粉而被储存起来。

测定原理:

6-磷酸葡萄糖脱氢酶可催化6PG和NADP+生成6磷酸葡萄糖酸和NADPH,NADPH在1-mPMS的作用下使WST-8显橙黄色,在450 nm下测定吸光值。

需自备的仪器和用品:

酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96孔板、研钵、冰、蒸馏水。


试剂的组成和配制:

提取液:液体60 mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体12mL×1瓶, 4℃保存;

试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;

试剂三:液体1.5mL×1管, 4℃避光保存。


6PG提取: 

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次), 8000g,25℃离心10min,取上清待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆,8000g,25℃离心10min,取上清待测。

3、血清(浆)等液体样品:直接测定。




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