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线粒体呼吸链复合体Ⅲ/CoQ细胞/色素C还原酶

简要描述:测定意义:
线粒体复合体Ⅲ(EC 1.10.2.2)又称CoQ-细胞/色素C还原酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分,负责把还原型CoQ的氢传递给细胞/色素C,生成还原型细胞/色素C。

  • 产品型号:FHTC-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-03-20
  • 访  问  量:184
详情介绍

测定意义:

线粒体复合体Ⅲ(EC 1.10.2.2)又称CoQ-细胞/色素C还原酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分,负责把还原型CoQ的氢传递给细胞/色素C,生成还原型细胞/色素C。


测定原理:

与氧化型细胞/色素C不同,还原型细胞/色素C在550nm有特征光吸收,因此550nm光吸收增加速率能够反映线粒体复合体Ⅲ酶活性。


需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。


试剂的组成和配制:

试剂一:液体100mL×1瓶,-20℃保存;

试剂二:液体20mL×1瓶,-20℃保存;

试剂三:液体1.5mL×1支,-20℃保存;

试剂四:液体20mL×1瓶,4℃保存;

试剂五:粉剂×1支,-20℃保存;

试剂六:液体2.5mL×1瓶,-20℃保存;


样本的前处理:

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

1、准确称取0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2、将匀浆600g,4℃离心5min。

3、弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。

4、上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白,可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅲ(此步可选做)。

5、步骤④中的沉淀即为线粒体,加入200uL试剂二和2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10秒,重复30次),用于复合体Ⅲ酶活性测定。


测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至550nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

(1)工作液的配制:将试剂五转移到试剂四中混合溶解,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、25μL试剂六和200μL工作液,立即混匀,记录550nm处初始吸光值A1和 2min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。




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