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(PFK)/6-磷酸果糖激酶/果糖-6-磷酸激酶

简要描述:测定意义:
PFK(EC 2.7.1.11)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,负责将果糖-6-磷酸和ATP转化为果糖-1,6二磷酸和ADP,是糖酵解过程的关键调节酶之一。

  • 产品型号:PFK-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-03-20
  • 访  问  量:220
详情介绍

测定意义:

PFK(EC 2.7.1.11)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,负责将果糖-6-磷酸和ATP转化为果糖-1,6二磷酸和ADP,是糖酵解过程的关键调节酶之一。


测定原理:

PFK催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-1,6-二磷酸和ADP,丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下测定NADH下降速率,即可反映PFK活性。


需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。


试剂的组成和配制:

提取液:100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;

试剂三:粉剂×1支,4℃保存;

试剂四:液体8μL×1支,4℃保存;


样本的前处理:

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为1000~5000:1的比例(建议2000万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测。


测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

(1)在试剂二瓶中加入17mL试剂一和1.13mL蒸馏水充分溶解,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

(2)在试剂三中加入1mL蒸馏水充分混匀,冰上放置备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

(3)在试剂四中加入1mL蒸馏水充分混匀,冰上放置待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

(4)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、10μL试剂三、10μL试剂四和170μL试剂二,混匀,立即记录340nm处20s时的吸光值A1和 10min20s后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2。




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