产品展示 / products 您的位置:网站首页 > 产品展示 > 生化试剂盒 > 辅酶Ⅰ系列 > FHTA-2-UV线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶

线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶

简要描述:测定意义:
复合体Ⅰ(EC 1.6.5. 3)又称NADH-CoQ 还原酶或NADH脱氢酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,是线粒体内膜中大的蛋白复合物。该酶催化一对电子从NADH传递给CoQ,同时可使O2还原生成O2.-,是呼吸电子传递链上产生O2.-的主要部位。测定该酶活性,不仅可以反映呼吸电子传递链(ETC)状态,而且可以反映活性氧(ROS)生成状态。

  • 产品型号:FHTA-2-UV
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-03-21
  • 访  问  量:212
详情介绍

测定意义:

复合体Ⅰ(EC 1.6.5. 3)又称NADH-CoQ 还原酶或NADH脱氢酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,是线粒体内膜中大的蛋白复合物。该酶催化一对电子从NADH传递给CoQ,同时可使O2还原生成O2.-,是呼吸电子传递链上产生O2.-的主要部位。测定该酶活性,不仅可以反映呼吸电子传递链(ETC)状态,而且可以反映活性氧(ROS)生成状态。


测定原理:

复合体Ⅰ能够催化NADH脱氢生成NAD+,在340nm下测定NADH的氧化速率计算出该酶活性的大小。


需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。


试剂的组成和配制:

试剂一:25mL×1瓶,-20℃保存;

试剂二:5mL×1瓶,-20℃保存;

试剂三:0.5 mL×1瓶,-20℃保存;

试剂四:25mL×1瓶,-20℃保存;

试剂五:1 mL×1支,-20℃保存;

试剂六:粉剂×1支,-20℃保存,用时加入2mL蒸馏水;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

工作液的配制:临用前将试剂五转移到试剂四中混合溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

样本的前处理:

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

①准确称取0.1g组织或收集500万细菌或细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

②将匀浆600g,4℃离心5min。

③弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。

④上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白,可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅰ(此步可选做)。

⑤步骤④中的沉淀即为线粒体,加入200uL试剂二和2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10秒,重复30次),用于复合体Ⅰ酶活性测定。


测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

(1)工作液于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min。

(2)在1mL石英比色皿中加入40μL样本、800μL工作液和60μL试剂六,立即混匀,记录340nm处初始吸光值A1和 2min后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2。




留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7