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柠檬酸合酶(CS)测试盒

简要描述:测定意义:
CS(EC 2.3.3.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,是三羧酸循环一个
限速酶,是三羧酸循环主要调控位点之一。

  • 产品型号:CS-2A-V
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-05-14
  • 访  问  量:225
详情介绍

测定意义:

CS(EC 2.3.3.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,是三羧酸循环一个

限速酶,是三羧酸循环主要调控位点之一。

测定原理:

CS 催化乙酰 CoA 和草酰乙酸产生柠檬酰酶 A,进一步水解产生柠檬酸;该反应促使无色的

DTNB 转变成黄色的 TNB,在 412nm 处有特征吸光值。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、无水乙醇和蒸

馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体 50mL×1 瓶,-20℃保存;

试剂二:液体 10mL×1 瓶,-20℃保存;

试剂三:液体 1mL×1 支,-20℃保存;

试剂四:液体 55mL×1 瓶,4℃保存;

试剂五:粉剂×1 瓶,4℃保存;

试剂六:粉剂×1 支,-20℃保存,临用前加入 2.4mL 蒸馏水,用不完的试剂仍-20℃保存;

样本的前处理:

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

1、称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞,加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研

钵匀浆。

2、将匀浆 600g,4℃离心 5min。

3、弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心 10min。

4、上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的 CS(此步可选做)。

5、在步骤④的沉淀中加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率 20%或

200W,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),用于线粒体 CS 测定。

 


测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 412nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

(1)在试剂五中加入 1.2mL 无水乙醇和 26mL 试剂四,混匀,37℃(哺乳动物)或 25℃( 其它

物种)孵育 5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

(2)测定管:在 EP 管中加入 40μL 样本、880μL 试剂五和 40μL 试剂六,混匀,37℃反

应 15min 后立即测定吸光值 A1。

(3)对照管:在 EP 管中加入 40μL 样本、880μL 试剂四和 40μL 试剂六,混匀,37℃ 反应 15min

后立即测定吸光值 A2。

(4)计算 ΔA=A1-A2,每个测定管设一个对照管




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