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丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒

简要描述:丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒

测定意义:
PDC主要存在于酵母中,是乙醇发酵的关键酶之一,催化丙酮酸脱羧生成乙醛

  • 产品型号:PDC-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-05-14
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详情介绍

丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒

测定意义:

PDC主要存在于酵母中,是乙醇发酵的关键酶之一,催化丙酮酸脱羧生成乙醛。

测定原理:

PDC催化丙酮酸脱羧生成乙醛,添加乙醇脱氢酶(ADH)来进一步催化 NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH在340 nm有吸收峰,而NAD+没有;通过测定340 nm光吸收下降速率,来计算PDC活性。

自备仪器和用品:

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体18mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体2.5mL×1瓶,4℃保存。

试剂四:粉剂×1支,﹣20℃保存。

试剂五:液体30μL×1瓶,﹣20℃保存。

混合试剂:临用前配制,将试剂四和试剂五转移至试剂三中充分溶解待用,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂六:液体2mL×1管,4℃保存。

粗酶液提取:丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒

1、细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率200W,工作3s,间歇10s,工作35次),16000g 4℃离心20min,取上清,置冰上待测。

2、组织处理:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,16000g 4℃离心20min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测。

PDC测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二置于25℃水浴中预热30min。

3. 空白管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸馏水、20μL混合试剂、140μL试剂二和20μL试剂六,迅速混匀后于340nm比色,记录15s和75s的吸光值,分别记为A1和A2。

4. 测定管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、20μL混合试剂、140μL试剂二和20μL试剂六,迅速混匀后于340nm比色,记录15s和75s的吸光值,分别记为A3和A4。

注意:空白管只需测定一次。





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