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单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒

简要描述:测定意义:
MDHAR 催化 MDHA 还原生成 AsA,在抗坏血酸氧化还原代谢中具有重要作用

  • 产品型号:MDHAR-2-UV
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-03-21
  • 访  问  量:211
详情介绍

测定意义:

MDHAR 催化 MDHA 还原生成 AsA,在抗坏血酸氧化还原代谢中具有重要作用。


测定原理:

MDHAR 催化 NADH 还原 MDHA 生成 AsA 和 NAD+,NADH 在 340 nm 有特征吸收峰, 但是 NAD+没有。通过测定 340 nm 光吸收下降速率,来计算出 MDHAR 活性。


需自备的仪器和用品:

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液枪和双蒸水。


试剂组成和配置:

试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 50mL×1 瓶,室温保存。

试剂三:粉剂×1 瓶(棕色),4℃保存。临用前加入 5mL 蒸馏水充分溶解。

试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 5mL 蒸馏水充分溶解。

试剂五:液体 25μL×1 瓶,4℃保存。临用前加 5mL 试剂二充分溶解。


粗酶液提取:

1、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。

2、细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7秒,总时间 3min);8000g,4℃离心 20min,取上清液置冰上混匀待测。

3、血清等液体:直接测定。


MDHAR 测定操作:

1、分光光度计预热 30 min,调节波长到 340 nm,蒸馏水调零。

2、试剂二在 25℃水浴锅中预热 30 min。

3、依次在比色皿中加入 100μL 试剂三、100μL 试剂四、100μL 试剂五和 600μL 试剂二,最后加入 100μL 上清液,迅速混匀后于 340nm 比色,记录 30s 和 150s 的吸光值 A1 和 A2,△A=A1-A2。


MDHAR 活性计算公式:

(1). 按蛋白浓度计算

MDHAR 活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol NADH 为 1 个酶活单位。

MDHAR (nmol/min /mg prot) = △A÷ε÷d×V 反总×109]÷(Cpr×V 样)÷T= 804×△A ÷Cpr

(2). 按样本质量计算

MDHAR 活性单位定义:25℃中每克样本每分钟氧化 1nmol NADH 为 1U。MDHAR (nmol/min /g 鲜重) = △A÷ε÷d×V 反总×109]÷(W×V 样÷V 样总)÷T= 804×△A ÷W

(3). 按细胞数量计算

MDHAR 活性单位定义:25℃中每 104 个细胞每分钟氧化 1nmol NADH 为 1 个酶活单位。

 

MDHAR (nmol/min/104 cell) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T= 804×△




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