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胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)测试盒

简要描述:测定意义:
ICDHc(EC 1.1.1.42)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化异柠檬酸脱氢脱羧生成 α-酮戊二酸,同时还原 NADP+生成 NADPH。ICDHc 是细胞质中除了磷酸戊糖途径外又一种NADPH 重要来源,在逆境中该酶活性通常会发生显著变化

  • 产品型号:ICDHC-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-03-22
  • 访  问  量:166
详情介绍

测定意义:

ICDHc(EC 1.1.1.42)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化异柠檬酸脱氢脱羧生成 α-酮戊二酸,同时还原 NADP+生成 NADPH。ICDHc 是细胞质中除了磷酸戊糖途径外又一种NADPH 重要来源,在逆境中该酶活性通常会发生显著变化。


测定原理:

利用 ICDHc 催化 NADP+还原成NADPH 反应,在 340 nm 下测定 NADPH 浓度的增加。


所需的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。


试剂的组成和配制:

提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:液体 19 mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;

试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存;


样本的前处理:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。


测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。 

2、将试剂二和试剂三转移至试剂一中充分溶解;在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种) 水浴 10min 以上;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

3、在微量石英比色皿或96 孔板中加入10μL 样本和190μL 试剂一,混匀后立即记录340nm

处 20s 后吸光值 A1 和 2min20s 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A2-A1。




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