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海藻糖如何提取

发布时间: 2023-06-15  点击次数: 789次
海藻糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。由于海藻糖具有的不同于其他碳水化合物的生物学特性,能在干旱、高温、脱水、冷冻、高渗透压及毒性物质等恶劣环境下保护生物体细胞蛋白质、脂肪、糖类、核酸等组分不受损害。
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。测定原理:蒽酮比色法。具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样品的测定等优点。
需自备的仪器和用品:可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿﹑研钵、浓硫酸(不允许快递) 和蒸馏水。
海藻糖提取:
1、细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3S,间隔10S,重复30次),室温静置45min,振荡3~5次,冷却后,8000g,25℃离心 10min,取上清。
2、组织的处理:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约 0.1g组织,加入1mL提取液),冰浴匀浆,室温静置45min,振荡3~5次,冷却后,8000g,25℃离心10min,取上清。
3、血清(浆)的处理:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议取0.1mL血清(浆)加入1mL 提取液),冰浴匀浆,室温静置45min,振荡3~5次,冷却后,8000g,25℃离心10min,取上清。