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莽草酸脱氢酶(SD)测试盒

简要描述:测定意义:
莽草酸途径是存在于植物、真菌和微生物中的一条重要的代谢途径,莽草酸脱氢酶是莽草酸合成途径中的关键酶。

测定原理:
莽草酸脱氢酶催化莽草酸和NADP产生NADPH,检测340nm下的吸光值增加速率来表示SD活性。

  • 产品型号:SD-2-UV
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-03-29
  • 访  问  量:389
详情介绍

莽草酸脱氢酶(Shikimate dehydrogenase,SD)试剂盒说明书

分光光度法 50管/48样

注   意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

莽草酸途径是存在于植物、真菌和微生物中的一条重要的代谢途径,莽草酸脱氢酶是莽草酸合成途径中的关键酶。


测定原理:

莽草酸脱氢酶催化莽草酸和NADP产生NADPH,检测340nm下的吸光值增加速率来表示SD活性。


需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。


试剂组成和配制:

提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体60mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×2瓶,4℃保存;


粗酶液提取:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。


测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

(1)在试剂二中加入25mL试剂一充分溶解混匀,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min,现配现用。

(2)取0.05mL样本和0.95mL试剂二于1mL比色皿中,混匀,在340 nm波长下立即记录20秒时的初始吸光度A1和5分20秒时的吸光度A2,计算ΔA=A2-A1。




SD活性计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

SD(nmol /min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V×样Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr


(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

SD(nmol /min /g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=643×ΔA÷W


(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

SD(nmol /min /104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=1.286×ΔA



V反总:反应体系总体积,1×10-3 L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.05 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。







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