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辅酶ⅡNADP(H)含量测试盒

简要描述:辅酶ⅡNADP(H)含量测试盒测定意义:
辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NADP+和NADPH含量测定可以计算NADP(NADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值,其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一,而且在PPP途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。

  • 产品型号:NADP-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-04-25
  • 访  问  量:226
详情介绍

辅酶ⅡNADP(H)含量测试盒说明书:

微量法100管/48样。

注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

测定意义:

辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NADP+和NADPH含量测定可以计算NADP(NADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值,其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一,而且在PPP途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。

辅酶ⅡNADP(H)含量测试盒测定原理:

分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP+和NADPH。NADPH通过PMS的递氢作用,使氧化型噻唑蓝(MTT)还原为甲瓒,570nm下检测吸光值,从而测定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原NADP+为NADPH,从而检测NADP+含量。

所需的仪器和用品:

酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

酸性提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。

碱性提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体10 mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1支,-20 ℃保存,用时加入3mL蒸馏水,混匀;溶解后4 ℃保存一周。

试剂三:粉剂×1支,-20℃保存,用时加入3mL蒸馏水,混匀;溶解后4℃保存一周。

试剂四:粉剂×1支,4 ℃保存,用时加入3mL蒸馏水,混匀;溶解后4℃保存一周。

试剂五:液体3.6mL×1支,4 ℃保存。

试剂六:液体30mL×1瓶,4 ℃保存。

试剂七:液体50mL×1瓶,4 ℃保存。

NADP+和NADPH的提取:

血清(浆)中NADP+和NADPH的提取

NADP+的提取:按照血清(浆)体积(mL):酸性提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议取约0.1mL血清(浆),加入1mL酸性提取液),95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μL上清液,加入500μL碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。

NADPH的提取:按照血清(浆)体积(mL):碱性提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议取约0.1mL血清(浆),加入1mL碱性提取液),95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μL上清液,加入500μL酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。




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