微量法 100T/96S
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
UDPG 焦磷酸化酶是生物体糖原合成过程中的关键酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化,将 1-磷酸葡萄糖与 UTP 分子合成为 UDP-葡萄糖(UDPG)。
测定原理
UGP 可逆催化反应生成 1 磷酸葡萄糖,在磷酸葡萄糖变位酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将 NADP 转化为 NADPH,340nm 的吸光值增加速率反映了 UGP 活性。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板
试剂组成和配制
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存。临用前加 2mL 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存。临用前加 2mL 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂四:粉剂×1 瓶,-20℃保存。临用前加 2mL 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。试剂五:液体 2mL×1 瓶,4℃保存。UDPG焦磷酸化酶(UPG)测试盒