丙酮酸磷酸双激酶（PPDK）测试盒

丙酮酸磷酸双激酶（PPDK）测试盒

分光光度法 50 管/48 样 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定 

测定意义： 

丙酮酸磷酸双激酶（pyruvate phosphate dikinase, PPDK, EC 2.7.9.1）是 C4 途径和景天科酸代谢途径的限速酶，催化 ATP、丙酮酸和 Pi 经三步反应生成磷酸烯醇式丙酮酸。该酶主要存在于 C4 植物的叶绿体基质中，对光合功能具有重要调节作用。 

测定原理： 

PPDK 的逆向反应催化磷酸烯醇式丙酮酸、AMP 和 PPi 生成丙酮酸、ATP 和 Pi，乳酸脱氢酶进一步催化丙酮酸和 NADH 生成乳酸和 NAD+，在 340nm 测定 NADH 减少速率，计算PPDK 活性。 

需自备的仪器和用品： 

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 

试剂的组成和配制： 

提取液：60mL×1 瓶，4℃保存； 

试剂一：液体 60 mL×1 瓶， 4℃保存； 

试剂二：粉剂×2 瓶，-20℃保存； 

试剂三 ：液体 60μL×1 支，4℃保存；体积较少，若沾在管壁上，临用前可低速离心后使用。样本的前处理：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 

测定步骤和加样表： 

1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。 

2、 样本测定（1）工作液的配制：临用前取试剂二一瓶加入 25mL 试剂一和 12.5μL 试剂三，充分混匀，置于 37℃水浴 5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。丙酮酸磷酸双激酶（PPDK）测试盒