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丙酮酸脱羧酶(PDC)

简要描述:丙酮酸脱羧酶(PDC)
分光光度法 50管/48样

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
PDC 主要存在于酵母中,是乙醇发酵的关键酶之一,催化丙酮酸脱羧生成乙醛。。

  • 产品型号:PDC-2-UV
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-05-04
  • 访  问  量:292
详情介绍

丙酮酸脱羧酶(PDC)


分光光度法 50管/48样

 

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

PDC 主要存在于酵母中,是乙醇发酵的关键酶之一,催化丙酮酸脱羧生成乙醛。

 

测定原理:

PDC 催化丙酮酸脱羧生成乙醛,添加乙醇脱氢酶(ADH)来进一步催化 NADH 还原乙醛生成乙醇和 NAD+NADH 在 340 nm 有吸收峰,而 NAD+没有;通过测定 340 nm 光吸收下降速率,来计算PDC 活性。

 

需自备的仪器和用品:

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。

 

试剂组成和配制:

试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 36mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:粉剂×1 支,﹣20℃保存。

试剂五:液体 60μL×1 支,﹣20℃保存。

混合试剂:临用前配制,将试剂四和试剂五转移至试剂三中充分溶解待用,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂六:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。丙酮酸脱羧酶(PDC)

粗酶液提取:

1、细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一,超声波破碎细菌或细胞(功率 200W,工作 3s,间歇 10s,工作 35 次), 16000g 4℃离心 20min,取上清,置冰上待测。

2、组织处理:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆,16000g 4℃离心 20min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)等液体样品:直接检测。

 







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