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γ-谷氨酰半胱氨-酸连接酶(GCL)测试盒

简要描述:谷氨酰胺(Gln)是 GSH 合成的限速酶,GSH 对 GCL 有反馈抑制作用。GCL 基因表达受多种因素调节,如氧化剂、抗氧化剂、生长因子和炎症因子等。

  • 产品型号:GCL-1-M
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-05-16
  • 访  问  量:573
详情介绍

γ-谷氨酰半胱氨-酸连接酶(GCL)测试盒

微量法 100T/96S 

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。 

测定意义: 

GCL 是 GSH 合成的限速酶,GSH 对 GCL 有反馈抑制作用。GCL 基因表达受多种因素调节,如氧化剂、抗氧化剂、生长因子和炎症因子等。GCL 活性高低对 GSH 含量和 GSH/GSSG比值有重要影响。 

测定原理: 

在 ATP 和 Mg2+存在下,GCL 催化谷氨-酸和半胱氨-酸合成γ-谷氨酰半胱氨-酸;同时 ATP 去磷酸化产生无机磷分子,通过测定无机磷增加速率,即可计算出 GCL 活性。 

自备仪器和用品: 

冷冻离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、浓硫酸和蒸馏水。 

试剂组成和配制: 

试剂一:液体 105mL×1 瓶,4℃保存。 

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加 6 mL 蒸馏水充分震荡溶解。 

试剂三:粉剂×1 管,4℃保存。临用前加入蒸馏水 1.5 mL 充分震荡溶解。 

试剂四:液体 7mL×1 瓶,室温保存。 

试剂五:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 12 mL 蒸馏水,充分震荡溶解后,缓缓加入 400µL浓硫酸(自备),边加边搅拌。 

粗酶液提取: 

  1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

  2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。

  3. 血清等液体:直接测定。γ-谷氨酰半胱氨-酸连接酶(GCL)测试盒

     

 

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