微量法 100T/96S
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
GSH-Px 是谷胱-甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱-甘肽(GSH)氧化的主要酶之一。GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱-甘肽与 ROS 反应,生成氧化型谷胱-甘肽 GSSG,从而保护生物膜免受 ROS 的损害,维持细胞的正常功能;而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。
测定原理:
GSH-Px 催化有机过氧化物氧化 GSH,产生 GSSG;谷胱-甘肽还原酶(GR)催化 NADPH 还原 GSSG,再生 GSH,同时 NADPH 氧化生成 NADP+;NADPH 在 340 nm 有特征吸收峰,而 NADP+没有;通过测定 340 nm 光吸收减少速率来计算 GSH-Px 活性。
自备仪器和用品:
低温离心机、水浴锅、可调节移液器、酶标仪、96 孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配置:
试剂一:液体 120mL×1 瓶,室温保存。
试剂二:粉剂×2 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 5μL×2 支,-20℃保存。
试剂四:液体 200μL×1 瓶,4℃保存。
粗酶液提取: 谷胱-甘肽过氧化物酶(GPX)测试盒
组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
血清等液体:直接测定。