微量法100管/48样
注 意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
淀粉-酶负责水解淀粉,主要包括α-淀粉-酶和β-淀粉-酶。β-淀粉-酶(EC 3.2.1.2)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。
测定原理:
还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。α-淀粉-酶不耐酸,β-淀粉-酶不耐热。根据上述特性,钝化其中之一,就可测出另一种淀粉-酶的活力。
β-淀粉-酶测试盒
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:30mL×1瓶,常温保存,若有黄色晶体析出,需90℃加热溶解后再用;
试剂二:15mL×1瓶,4℃保存,若出现沉淀析出,需70℃加热溶解后再用。
粗酶液提取:
组织:称取0.1~0.2g样本(建议称取约0.1g样本),加入1mL蒸馏水,研磨匀浆;将匀浆倒入离心管中,提取液在室温下放置提取15min,每5min振荡1次,使其充分提取;3000g,25℃离心10min,取上清液加蒸馏水定容至10 mL,摇匀,即淀粉-酶原液。
吸取上述淀-粉酶原液1mL,加入4mL蒸馏水,摇匀,即为淀粉-酶稀释液,用于(α+β)淀粉-酶总活力的测定。
血清(浆)等液体样本:(1)直接检测α-淀粉-酶。(2)吸取淀粉-酶原液1mL,加入4mL蒸馏水,摇匀,即为淀粉-酶稀释液,用于(α+β)淀粉-酶总活力的测定。