微量法 100T/96S
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
维生素 B6(Vitamin B6)又称吡哆素,其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺,在体内以磷酸酯的形式存在,是一种水溶性-维生素,在细胞中参与多种蛋白质和氨基酸的代谢,对生物体具有极其重要的作用。
测定原理
VB6 与 4-氨基安替-比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物,在 390nm 有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅、蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液:液体 70mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 1mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 8mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体 8mL×1 瓶,4℃避光保存。
样本处理
组织:将样品磨碎,按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约0.1g,加入 0.6mL 提取液)加入提取液,60℃浸提 30min,加蒸馏水 0.4mL,混匀后于25℃,16000rpm 离心 10min,取上清测定(动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心20-30 分钟)。
细胞:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500万细胞加入 0.6mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);加蒸馏水 0.4mL,混匀后于 25℃,16000rpm 离心 10min,取上清测定。维生素B6测试盒