分光光度法 50 管/48 样
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
蛋白质含有三种含硫氨基酸:甲硫-氨酸、胱-氨酸和 Cys。其中,Cys 是一种含有巯基的含硫氨基酸,从甲硫-氨酸转化而来,并且可与胱-氨酸互相转化。Cys 参与蛋白质二硫键的形成,经常是蛋白质活性中心的组成部分,还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外,Cys大量积聚在皮肤和粘膜表面,在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性,并且补充巯基,以维持皮肤的正常代谢,调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。
测定原理:
Cys 还原磷钨酸生成钨蓝,在 600nm 处有吸收峰;通过 600nm 吸光度,计算 Cys 含量。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、低温离心机、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、85%磷酸和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 60mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。用前 1 天,向试剂三中加 1.5mL 蒸馏水充分溶解,再加 85%磷酸 0.375mL,混匀后盖紧(防止水分散失)沸水浴 2h;冷却后加 6mL 蒸馏水,4℃可保存2 周。标准品:粉剂×1 瓶,临用前加 10 mL 蒸馏水,充分溶解。1μmol/mL 标准液,4℃避光保存。用不完的试剂 4℃可保存 3 天。半胱-氨酸(Cys)含量测试盒