微量法 100 管/96 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
ME 广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中,尤其在植物组织中活性较高。ME催化苹果酸氧化脱羧的可逆反应,产生丙酮酸和 CO2,以及伴随 NAD(P)+的还原反应,是苹果酸代谢的关键酶。ME 活性与生物合成和抗氧化密切相关。近年来植物 ME 活性测定较多,已经成为抗氧化研究的热点。根据辅酶专一性和对底物特异性的不同,可将 ME 分为NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.40)。
测定原理:
NADP-ME 催化 NADP+还原成 NADPH,在 340nm 下测定 NADPH 增加速率。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:100mL×1 瓶,4℃保存。;
试剂一:液体 30mL×1 瓶,4℃保存;NADP苹果酸酶(NADP-ME)测试盒
试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存; 临用前加入 20mL 试剂一充分振荡,溶解待用,用不完的试剂分装后-20 度保存,禁止反复冻融。
试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 2.5mL 蒸馏水充分振荡,溶解待用,用不完的试剂分装后-20 度保存,禁止反复冻融。