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过氧化氢(H2O2)测试盒

简要描述:注意:正式测定前取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
H2O2 是生物体内常见的活性氧分子,主要由 SOD 和 XOD 等催化产生,由 CAT 和 POD 等催化降解。H2O2 不仅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互转化的枢纽。一方面,H2O2 可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体;另一方面H2O2 也是许多氧化应急反应

  • 产品型号:H2O2-2 -V
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-03-29
  • 访  问  量:341
详情介绍

过氧化氢含量(H2O2)试剂盒说明书


分光光度法 50管/48样


注意:正式测定前取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

H2O2 是生物体内常见的活性氧分子,主要由 SOD 和 XOD 等催化产生,由 CAT 和 POD 等催化降解。H2O2 不仅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互转化的枢纽。一方面,H2O2 可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体;另一方面H2O2 也是许多氧化应急反应中的关键调节因子,。


测定原理:

H2O2 与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物,在 415nm 有特征吸收。


需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、丙酮 60mL、浓盐酸 10mL、研钵和冰。


试剂的组成和配制:

试剂一:丙酮 60mL×1 瓶,4℃保存;(自备)

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 10mL 浓盐酸充分溶解备用。用不完的试剂 4℃保存;(溶解时间较长,约 30min,可 40℃-60℃加热溶解,务必提前准备)

试剂三:15mL×1 瓶,4℃保存;

试剂四:60mL×1 瓶,4℃保存;


H2O2 提取:

1、细菌或细胞样品的制备:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30次);用试剂一定容至 1mL;8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、组织样品的制备:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆;转移至 EP 管中,用试剂一定容至 1mL,8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测。



测定步骤:

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 415nm,蒸馏水调零。

2、将试剂二、三和四 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上。

3、在 EP 管中按顺序加入下列试剂


试剂名称(μL) 测定管 对照管

样本 吸取的量的为全部上清液

试剂一  1000

试剂二 100 100

试剂三 200 200

4000g,25℃离心 10min,弃上清,留沉淀

试剂四 1000 1000

加入试剂四溶解沉淀后,室温静置 5min,倒入比色皿中,测定 415nm 处吸光值 A。对照管只要做一次即可。计算 ΔA=A 测定-A 对照。


注意事项:

1、由于试剂一易挥发,试剂一必须先预冷再加,研磨时必须在冰上研磨。

2、本试剂盒中试剂的挥发性较高,请带一次性手套和口罩。


H2O2 含量计算:

1、标准条件下测定的回归曲线,y = 0.7488x + 0.0006 (x 为标准品浓度,μmol/mL;y 为 ΔA)。

2、血清(浆)中 H2O2 含量的计算:

H2O2 含量(μmol/mL)=(ΔA-0.0006) ÷0.7488=1.34×(ΔA-0.0006)


3、细菌、细胞或组织中 H2O2 含量计算

(1) 按照蛋白浓度计算

H2O2 含量(μmol/mg prot)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(V1×Cpr)= 1.34×(ΔA-0.0006)÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。


(2) 按照样本质量计算

H2O2 含量(μmol/g 鲜重)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(W ×V1÷V2)= 1.34×(ΔA-0.0006)÷W


(3 ) 按照细菌或细胞密度计算:

H2O2 含量(μmol/104)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0027×(ΔA-0.0006)


V1:加入反应体系中样本体积,1mL;V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,

mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。



注意:

标曲线性范围为 0.1μmol/mL 到 2μmol/mL,吸光度 ΔA 线性范围为 0.07-1.5,若 ΔA超过 1.5 则需要稀释,计算公式乘以相应稀释倍数。






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