产品展示 / products 您的位置:网站首页 > 产品展示 > 生化试剂盒 > 氧化与抗氧化系列 > CAT-2 -UV过氧化氢酶(CAT)测试盒(紫外吸收法)

过氧化氢酶(CAT)测试盒(紫外吸收法)

简要描述:过氧化氢酶(CAT)测试盒(紫外吸收法)
注 意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是最主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。

  • 产品型号:CAT-2 -UV
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-05-05
  • 访  问  量:433
详情介绍

过氧化氢酶(CAT)测试盒(紫外吸收法)

                                  分光光度法50管/48样


注   意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:                          

CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是最主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。


测定原理:

H2O2在240nm下有特征吸收峰,CAT能够分解H2O2,使反应溶液240nm下的吸光度随反应时间而下降,根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。


需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水


试剂组成和配制:

提取液:60mL×1瓶,4℃保存;

工作液:60mL×1瓶,4℃保存;


粗酶液提取:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

过氧化氢酶(CAT)测试盒(紫外吸收法)

测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至240nm处,蒸馏水调零。

2、测定前将CAT检测工作液37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min。

3、在1mL石英比色皿中加入35μL样本和1mL工作液,混匀,室温下立即测定240nm下的初始吸光值A1和1min后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2


注意事项:

出现负值怎么办?

检查反应过程是否产生气泡,气泡多说明酶活性太高,气泡影响产生了负值,可以将样本用提取液稀释10倍后再检测。如果稀释样本或反应体系没有产生气泡仍然出现较小的负值,说明该样本测不到该酶活。


CAT活性计算:

1、血清(浆)CAT活力的计算:

单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

CAT(nmol/min/mL)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=678×ΔA

2、组织、细菌或细胞中CAT活力计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

CAT(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=678×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

CAT(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总)÷T=678×ΔA÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

CAT(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T =1.356×ΔA

V反总:反应体系总体积,1.035×10-3 L;ε:H2O2摩尔消光系数,4.36×104 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.035 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;500:细胞或细菌总数,500万。


过氧化氢酶(Catalase,CAT)试剂盒说明书

                                  分光光度法50管/48样


注   意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:                          

CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是最主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。


测定原理:

H2O2在240nm下有特征吸收峰,CAT能够分解H2O2,使反应溶液240nm下的吸光度随反应时间而下降,根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。


需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水


试剂组成和配制:

提取液:60mL×1瓶,4℃保存;

工作液:60mL×1瓶,4℃保存;


粗酶液提取:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养






留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7