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碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒

简要描述:注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。

测定原理:
在碱性环境中,AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与4-氨基安替林和铁化钾反应红色亚醌衍生物,在510nm有特

  • 产品型号:AKP-2-V
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-03-29
  • 访  问  量:363
详情介绍

碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP/ALP)活性测定试剂盒

说明书

                                                  分光光度法50管/24样

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:                          

AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。


测定原理:

在碱性环境中,AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与4-氨基安替/比林和铁化钾反应红色亚醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通过测定510 nm吸光度增加速率,来计算AKP活性。


自备仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。


试剂组成和配制:

试剂一:液体×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体×1瓶,4℃避光保存。

试剂四:液体×1瓶,4℃避光保存,未变成蓝绿色之前均可使用。

标准品:液体×1支(EP管中),2 μ mol/mL酚标准液,4℃保存。


粗酶液提取:

1.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,4℃、8000g离心10min,取上清液待测。

2.细菌或细胞:按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

3.血液可直接测定,或者适当稀释后测定。


测定步骤:

1. 分光光度计预热30min,调节波长到510 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂三置于37℃水浴中预热30 min。

3. 空白管:取EP管,加入20μL蒸馏水,200μL试剂二,200μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四600μL,混匀后于510 nm测定吸光度,记为A空白管。

4. 标准管:取EP管,加入20μL标准品,200μL试剂二,200μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四600μL,混匀后于510 nm测定吸光度,记为A标准管。

5.对照管:取EP管,加入20μL上清液,200μL蒸馏水,200μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四600μL,混匀后于510 nm测定吸光度,记为A测定管。

6. 测定管:取EP管,加入20μL上清液,200μL试剂二,200μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四600μL,混匀后于510 nm测定吸光度,记为A测定管。

注意:空白管和标准管只需测定一次。每个测定管设一个对照管。








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