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抗坏血酸过氧化物酶(APX)

简要描述:测定意义:
APX是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一,也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX具有多种同功酶,分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体,以及过氧化体和类囊体膜上。APX 催化H2O2氧化AsA,是植物AsA 的主要消耗者。APX的活性直接影响到AsA的含量,APX与AsA具有一定的负相关性。

  • 产品型号:APX-2-UV
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-05-14
  • 访  问  量:363
详情介绍

抗坏血酸过氧化物酶(ascorbate peroxidase,APX)活性测定

试剂盒说明书

分光光度法50管/48样


注   意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

APX是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一,也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX具有多种同功酶,分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体,以及过氧化体和类囊体膜上。APX 催化H2O2氧化AsA,是植物AsA 的主要消耗者。APX的活性直接影响到AsA的含量,APX与AsA具有一定的负相关性。


测定原理:

APX 催化催化H2O2氧化AsA,通过测定AsA氧化速率,来计算得APX活性。

自备仪器用品:

低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。


试剂组成和配制:

试剂一:液体90mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加5 mL蒸馏水充分溶解。

试剂三:液体5mL×1支,4℃保存。


粗酶液提取:

按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。13000g,4℃离心20min,取上清置冰上待测。



测定:

1. 分光光度计预热30 min,调节波长到290nm,用蒸馏水调零。

2. 试剂一在25℃中预热30min。

3. 依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、700μL预热的试剂一、100μL试剂二和100μL试剂三,迅速混匀后在290nm测定10 s和130 s光吸收A1和A2,△A=A1-A2。


APX活性计算公式:


(1)  按样本蛋白浓度计算

活性单位定义:每毫克蛋白每分钟氧化1nmol AsA 为1个酶活单位。


APX(nmol/min/mg prot) = △A÷(ε×d)×V反总×109÷(Cpr×V样)÷T

=1786×△A÷ Cpr


(2)按样本质量计算

活性单位定义:每g组织每分钟氧化1nmol AsA 为1个酶活单位。


APX(nmol/min/g鲜重 ) = △A÷(ε×d)×V反总×109÷(W×V样÷V样总)÷T

=1786×△A ÷W


ε:AsA在290nm处摩尔吸光系数为2.8×103 L/mol/cm;d:比色皿光径(cm),1 cm;V反总:反应体系总体积(L),1000μL=1×10-3 L;109:1mol=1×109nmol;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),100μL=0.1 mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒;W:样本质量,g;T:催化反应时间(min),2min。


注意事项:

配制好的试剂二4℃保存,并且3天内使用完。






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