线粒体分离和线-粒体酶提取测试盒

分光光度法 50 管/48 样 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定 

测定意义 

线粒体是半自主性细胞器，不仅是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷（ATP）的主要场所，为细胞的活动提供能量，而且在许多生命活动中具有重要调控作用。因此，准确和全面分离保持正常活性的线粒体已经成为许多研究的前提。 

测定原理 

利用专门试剂温和匀浆组织和细胞，再采用差速离心法从匀浆中分离完整线粒体；利用专门试剂，配合超声波破碎线粒体，可以得到保持活性的线粒体酶。 

需自备的仪器和用品 

超声波破碎仪、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。 

试剂的组成和配制 

试剂一：50mL×1 瓶，-20℃保存； 

试剂二：10mL×1 瓶，-20℃保存； 

试剂三：10mL×1 瓶，-20℃保存； 

试剂四：1mL×1 支，-20℃保存； 

提取步骤 

1、 准确称取约 0.1g 组织或收集约 500 万细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂四，用冰浴匀浆器或研钵研磨。 

2、 4 ℃ 600 g 离心 5min。 

3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，4 ℃ 11000 g 离心 10min。 

4、 上清液即胞浆提取物，可用于研究线粒体蛋白向胞浆的释放。 线粒体分离和线-粒体酶提取测试盒

5、 沉淀为完整线粒体。含有完整的内膜和外膜，并具有线粒体的生理功能。可用于线粒体的生理功能等方面的研究。 

6、 在沉淀中加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂四，超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），可用于线粒体酶活性测定。 

7、 在沉淀中加入 200uL 试剂三和 2uL 试剂四，超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），可用于线粒体蛋白浓度测定。