分光光度法 50 管/48 样
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官,故尿中氨基酸的变化最能反应肝、肾的生理状态。另外,氨基酸还能反应灼伤、伤寒等方面情况。植物体内氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。
测定原理:
氨基酸的 α-氨基可与水合茚三酮反应,产生蓝紫色化合物,在 570 nm 有特征吸收峰;通过测定 570 nm 吸光度,来计算氨基酸含量。
自备仪器及用品:
台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵、无水乙醇、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 60 mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 瓶(棕色),4℃避光保存。临用前加入 2 mL 无水乙醇,盖紧后充分混匀,再加入 28 mL 试剂二混匀,避光保存。
试剂四:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加 5 mL 试剂二,充分溶解。
样品中 AA 提取:
1. 按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入1mL 试剂一)进行室温匀浆,8000g,4℃离心 10min,取 200μL 上清转移到 1.5 mL EP 管中,加入 200μL 试剂二盖紧后(防止水分散失)置于沸水浴 15 min,冷却至室温后待测。氨基酸(AA)含量测试盒